芽孢数测定方法

（ATCC 7953、ATCC12980嗜热脂肪杆菌）

准备器具：                                           推荐培基：

搅拌器                                           Soybean-Casein Digest Agar

（以下物品需灭菌）                                      [Formula]

玻璃球（直径5-6mm）                                               Casein Peptone       15g/L

Buffer：生理食盐水（含0.1%Tween80）                                     Soybean Peptone      5g/L

有盖子的试验管或离心用TUBE（CORNING）                                 NaCl                  5g/L

培养皿（SCDA培养基）、定量吸管等                                       Agar                  15g/L

                                                Final pH7.1～7.5

芽孢测定方法（室温）（涂抹法）（嗜热脂肪杆菌是微好氧菌）

1. 将BI菌纸1条、玻璃球20个和Buffer10ml放入容器（有盖子的试验管等）内，浸10分钟以上。

2. 将容器放在搅拌器上振荡搅拌，至菌纸完全粉碎为止。搅拌数分钟以目視判断。然后静置30分钟以上，再次振荡搅拌。

3. 用Buffer稀释。

4. 最终稀释完的试验管放入95-100℃的开水中浸15分钟（杀灭发芽的菌体）。加热完后马上用自来水冲加以冷却。

5. 最终稀释液注入3个培养皿培基的表面（培基要提前2-3日做好，让培基表面干燥），每个注入0.1ml，用涂抹棒将芽孢稀释液涂抹均匀，静置两小时以上使芽孢稀释液被培养基完全吸收，然后放入培养器。55-60℃培养48小时后计数菌落，按照稀释倍率计算芽孢数（求3个培养皿的平均值）。

计算例子：

菌落数为30时

菌数：30×10⁵＝3.0×10⁶